Skip to content

Receptor A2 fosfolipazy typu M jako docelowy antygen w idiopatycznej nefropatii błoniastej cd

2 miesiące ago

495 words

Wykryliśmy PLA2R przy użyciu przeciwciał przeciw PLA2R świnki morskiej (w rozcieńczeniu 1: 150), a następnie sprzężone z Cy3 przeciwciało drugorzędowe (patrz Dodatek dodatkowy) i ustalono swoistość przez wstępne pochłanianie pierwszorzędowego przeciwciała rekombinowanym fragmentem królika. Białko PLA2R15 zawierające domeny lektynowe typu C (CTLD) 4, 5 i 6. Zastosowaliśmy komercyjne królicze przeciwciało przeciwko ludzkiej agrynie w rozcieńczeniu 1:25 (Santa Cruz Biotechnology), a następnie sprzężone wtórne przeciwciało Alexa Fluor 488 (Invitrogen), aby określić błony podstawnej kłębuszków nerkowych. Aby wykryć jądra podocytów, wykorzystaliśmy królicze przeciwciała przeciwko antygenowi guza Wilmsa w rozcieńczeniu 1: 100 (Santa Cruz Biotechnology). Wykryliśmy IgG4 w złogach immunologicznych od pacjentów z błoniastą nefropatią, stosując owcze przeciwciała anty-IgG4 w rozcieńczeniu 1: 500 (miejsce wiązania), a następnie drugorzędowe przeciwciało skoniugowane z izotiocyjanianem fluoresceiny. Jądra komórkowe wizualizowano przez włączenie bariery jądrowej (Hoechst 33342, Molecular Probes) w ośrodku nośnym. Obrazy immunofluorescencyjne otrzymano na mikroskopie (TE-2000, Nikon) połączonym z kamerą CCD chłodzoną Peltierem (CoolSNAP HQ, Photometrics). Mikroskopię konfokalną przeprowadzono przy użyciu instrumentu konfokalnego z wirującą tarczą (UltraVIEW LCI, PerkinElmer). Analiza statystyczna
Przeprowadzono analizę chi-kwadrat, aby porównać obserwowane z oczekiwanymi wynikami. Hipoteza zerowa polegała na tym, że pozytywny sygnał w analizie metodą Western blot wystąpiłby u podobnej liczby osobników w każdej grupie, na podstawie przypadku.
Wyniki
Identyfikacja docelowego białka w ekstraktach kłębuszkowych
Ryc. 1. Wyniki Western blotting białek kłębuszkowych z surowicą od pacjentów z idiopatyczną nefropatią błoniastą. Wierzchołek panelu A pokazuje wyniki Western blotting ekstraktu ludzkich białek kłębuszkowych z próbkami surowicy od każdego z pięciu pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią (MN1 do MN5) i pięcioma pacjentami z innymi warunkami białkowo -urowymi (dwie z ogniskową i segmentową stwardnieniem kłębuszków nerkowych [FGS1] i FGS2] i trzech z nefropatią cukrzycową [DN1, DN2 i DN3]). Próbki surowicy od pięciu pacjentów z błoniastą nefropatią rozpoznawały prążek około 185 kD, podczas gdy próbki od pacjentów z innymi chorobami nie. Dno panelu A pokazuje wyniki Western blotting, z reaktywnymi próbkami surowicy od pięciu pacjentów z błoniastą nefropatią, białek kłębuszkowych, które były deglikozylowane peptydem N-glikozydaza F (PNGaza F +) lub nie deglikozylowanymi (PNGaza F-). Wszystkie pięć próbek wykazało antygen natywny 185 kD i deglikozylowane białko o w przybliżeniu 145 kD. Panel B pokazuje specyficzność reaktywności próbek surowicy do antygenu 185 kD.
W warunkach nieredukujących wykonano Western blotting wyciągów z normalnych ludzkich kłębuszków z nerki dawcy z próbkami surowicy od 37 pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią. Prążek białka o masie cząsteczkowej 185 kD wykryto w próbkach od 26 pacjentów (70%) (ryc. 1). Identyczny prążek białkowy zaobserwowano w ekstraktach kłębuszkowych przygotowanych do tej pory z wszystkich pojedynczych nerki dawcy
[podobne: nutraceutyki, kasetony świetlne, olejek arganowy ]

Powiązane tematy z artykułem: kasetony świetlne nutraceutyki olejek arganowy